EVALUACIÓN DE ACTIVIDAD IN VIVO DE UNA FORMULACIÓN DE “MEZCLA DE POLEN DE MIEL DE ABEJAS”.

Küpeli Akkol E  , Orhan DD , Gürbüz I , Yesilada E .

La formulación de la mezcla de polen de abeja (HBM) es eficaz para el tratamiento del asma, bronquitis, cánceres, úlceras pépticas, colitis, varios tipos de infecciones, incluida la hepatitis B, y el reumatismo de los distribuidores de hierbas en el noreste de Turquía. En el presente estudio, in vivolos efectos antinociceptivos, antiinflamatorios, gastroprotectores y antioxidantes de la miel pura y la formulación de HBM se evaluaron comparativamente. El HBM no mostró actividad gastroprotectora significativa en una sola administración a una dosis de 250 mg / kg, mientras que se observó una actividad débil después de tres días de administración sucesiva a una dosis de 500 mg / kg. Por otro lado, el HBM mostró actividades antinociceptivas significativas (p <0.01) y antiinflamatorias (p <0.01) a dosis de 500 mg / kg por vía oral sin inducir ninguna toxicidad aguda aparente o daño gástrico. También se demostró que HBM posee una potente actividad antioxidante antilípido (p <0.01) a dosis de 500 mg / kg contra el modelo de necrosis hepática inducida por paracetamol en ratones. Por otro lado, la miel pura no ejerció ninguna actividad notable antinociceptiva, antiinflamatoria y gastroprotectora, pero se determinó una potente actividad antilipidperoxidante (p <0.01). Los resultados han demostrado claramente que la mezcla de miel pura con polen de abeja aumentó significativamente el potencial de curación de la miel y proporcionó un apoyo adicional para su uso tradicional. Los contenidos fenólicos y flavonoides totales de HBM fueron de 145 y 59.3 mg / 100 g de miel, que se estimaron como equivalentes de ácido gálico y quercetina, respectivamente.

Introducción

A medida que las abejas recolectan el néctar para convertirlo en miel de las flores, el polen de los órganos masculinos de las flores se adhiere al cuerpo y las patas de la abeja, particularmente se deposita en las cavidades peludas de las patas traseras. Con el fin de obtener esta masa de polen, los colmenares colocan una malla de alambre delante de la colmena por la que pasan las abejas para llegar a la colmena; los granos de polen permanecen pegados a la malla. Esta masa pegajosa de polen se recoge como “polen de abeja” y es la mezcla de pólenes recolectados de diferentes especies de plantas en el medio ambiente por la abeja melífera; la composición puede variar según el origen ( Alcamaraz-Abarcas et al., 2007Alcamaraz-Abarcas N , Campos MG , Avila-Reyes JA , Naranjo-Jiménez N , Corral JH , Gonzales-Valdez LS (2007) : Actividad antioxidante del extracto polifenólico del polen monofloral recolectado de abejas de mezquite ( Prosopis juliflora , Leguminosae) . J Food Compos Anal 20: 119 – 124 . [Google Scholar] ).

El análisis de los gránulos de polen de abeja generalmente reveló que los polisacáridos (50%), azúcares simples (4-10%), proteínas (6-28%), aminoácidos (6%) y lípidos (1-20%) son los principales componentes. de polen de abeja, además de una variedad de metabolitos secundarios como flavonoides, carotenoides y terpenos, entre otros ( Alcamaraz-Abarcas et al., 2007Alcamaraz-Abarcas N , Campos MG , Avila-Reyes JA , Naranjo-Jiménez N , Corral JH , Gonzales-Valdez LS (2007) : Actividad antioxidante del extracto polifenólico del polen monofloral recolectado de abejas de mezquite ( Prosopis juliflora , Leguminosae) . J Food Compos Anal 20: 119 – 124 . [Google Scholar] ). Las abejas son vegetarianas y usan polen como fuente de proteínas y vitaminas para alimentar a las larvas, mientras que el néctar recolectado de las flores se usa como fuente de carbohidratos en el peine. Posee un alto valor nutritivo particularmente rico en vitaminas, aminoácidos, proteínas y polisacáridos y se comercializa en todo el mundo como un alimento tónico especialmente para los ancianos para mejorar los efectos asténicos del envejecimiento (Ozcan et al., 2004Ozcan M , Unver A , Ceylan DA , Yetisir R (2004) : efecto inhibidor del polen y extractos de propóleos . Nahrung / Food 48: 188 – 194 .[Crossref] , [PubMed] ,  [Google Scholar] ). El polen de abeja también se cree en las medicinas populares durante siglos para ser un remedio contra diversos tipos de enfermedades.

La miel también contiene una serie de componentes; estos incluyen flavonoides, ácidos fenólicos, aminoácidos, proteínas, enzimas (glucosa oxidasa, catalasa, peroxidasa), carotenoides, vitaminas (C y E) ( Baltrusaityte et al., 2007Baltrusaityte V , Venkutonis PR , Ceksteryte V (2007) : actividad de barrido radical de diversos extractos fenólicos de miel de origen floral y panceta . Food Chem 101: 502 – 514 .[Crossref] , [Web of Science ®] ,  [Google Scholar]) Debido a los ricos contenidos nutritivos de la miel y el polen de abeja, los distribuidores de hierbas en Turquía combinan estos productos de colmenas y comercializan la mezcla como formulación de “miel de abeja-polen” (HBM), que ha sido ampliamente propuesta para el tratamiento de varios síntomas o enfermedades . Estos incluyen enfermedades infecciosas (bronquitis, tuberculosis, hepatitis B, etc.), trastornos inflamatorios (cialgia, reumatismo, asma y colitis), enfermedades inmunes (eczema, cáncer) y gastrointestinales (úlcera péptica), así como problemas de infertilidad (comunicación personal). Herb dealer Mehmet Güneysu, Hemsin, Rize). Estudios previos han demostrado que la miel sirve como fuente de antioxidantes naturales, efectivos para reducir el riesgo de enfermedades cardíacas, cánceres, inmunodeficiencias, cataratas y diversos trastornos inflamatorios ( National Honey Board, 2003National Honey Board (2003) : Salud de la miel y cualidades terapéuticas, The National. Honey Board , 390 Lashley Street, Longmont, CO 80501-6045,www.nhb.org. [Google Scholar] ). Sin embargo, los efectos antinociceptivos, antiinflamatorios, gastroprotectores y antioxidantes potenciales atribuidos a la mezcla de polen de abeja no se han evaluado hasta el momento (National Honey Board, 2003National Honey Board (2003) : Salud de la miel y cualidades terapéuticas, The National. Honey Board , 390 Lashley Street, Longmont, CO 80501-6045,www.nhb.org. [Google Scholar] ).

Con el fin de evaluar estas declaraciones de propiedades saludables, el objetivo del presente estudio fue investigar los efectos in vivo antinociceptivos, antiinflamatorios, gastroprotectores y antioxidantes de la formulación de HBM en ratas y ratones. Además, se determinaron los contenidos totales de fenol y flavonoide de la formulación de HBM para encontrar una correlación entre las actividades biológicas, particularmente para la actividad antioxidante mediante el uso de reactivos de Folin-Ciocalteu y cloruro de aluminio.

Resultados y discusión

La actividad antinociceptiva de la miel y la formulación de HBM se estudió utilizando el modelo de writhing inducido por p -benzoquinona en ratones. Se observó una relación de actividad dependiente de la dosis y la formulación de HBM inhibió significativamente las writhes inducidas químicamente en la dosis de 500 mg / kg sin inducir ninguna toxicidad aguda aparente o daño gástrico. La actividad de la formulación de HBM fue el doble que la de la miel ( Tabla 1 ).

Tabla 1.  Efecto de la mezcla de polen de miel y abeja y miel contra lascontorsiones inducidas por p -benzoquinona en ratones.

Muestras de prueba Dosis por vía oral (mg / kg) Número de contorsiones ± SEM Ratio de inhibición (%) Proporción de ulceración
Controlar 45.7 ± 3.9 0/6
Miel 250 43.3 ± 2.7 5.3 0/6
500 36.3 ± 2.7 20.6 0/6
Mezcla de polen de miel y abeja 250 39.8 ± 2 12.9 0/6
500 27.5 ± 1.8 * 39.8 0/6
COMO UN 100 22.8 ± 2.1 ** 50.1 4/6
200 20.4 ± 1.9 ** 55.4 5/6

* p <0.01; ** p <0.001 significativo del valor de control.

Los materiales fueron investigados por su efecto antiinflamatorio usando el modelo de edema de pata trasera inducido por carragenina en ratones. Como se muestra en la Tabla 2 , se encontró una actividad antiinflamatoria dependiente de la dosis para la formulación de HBM, que proporcionó una actividad inhibidora significativa entre 18.2% y 31.9% a la dosis de 500 mg / kg, mientras que la miel se encontró inactiva contra este modelo de inflamación .

Tabla 2.  Efectos de la mezcla de polen de miel y abeja y miel contra el edema de pata inducido por carragenina en ratones.

Muestras de prueba Dosis por vía oral (mg / kg) Espesor de hinchazón (x10 -2 mm) ± SEM (inhibición%)
90 min 180 minutos 270 min 360 min
Controlar 46.2 ± 5.5 54.2 ± 5.1 58.5 ± 4.7 63.2 ± 4.5
Miel 250 47.4 ± 3.2 58.6 ± 3.2 61.8 ± 4 67.9 ± 3.9
500 41.5 ± 4 (10.7) 44.5 ± 3.5 (17.9) 46.5 ± 4.4 (20.5) 49.3 ± 5.5 (21.9)
Mezcla de polen de miel y abeja 250 40.2 ± 3.1 (12.9) 45,4 ± 3,7 (16,2) 49.9 ± 4.2 (14.7) 48.2 ± 4.6 (23.7)
500 37.8 ± 4.8 (18.2) 39 ± 3.9 (28) * 40,3 ± 3,6 (31,1) ** 43 ± 3,3 (31,9) **
Indometacina 10 34.5 ± 2.2 (25.3) 33.8 ± 2.8 (37.6) ** 34,5 ± 2,9 (41) *** 37.8 ± 2.7 (40.2) ***

* p <0.05; ** p <0.01; *** p <0.001 significativo del valor de control.

El efecto gastroprotector de la formulación de HBM y la miel se ensayó frente a las lesiones gástricas inducidas por EtOH en ratas. Como se muestra en la Tabla 3 , la formulación de HBM se encontró completamente inactiva a dosis de 250 mg / kg en la administración de dosis única, mientras que la miel ejerció una protección del 24,3% (no significativa) contra las lesiones inducidas por EtOH. Luego, se administraron dos veces la dosis más alta (500 mg / kg) de los materiales de prueba durante tres días consecutivos antes de la inducción de úlceras. El nivel de gastroprotección proporcionado por la miel fue del 40.5% en comparación con el 67.6% proporcionado por la formulación de HBM a esta dosis, pero los valores no fueron estadísticamente significativos.

Tabla 3.  Efectos de la administración aguda y subaguda de la mezcla de polen de miel y abeja y miel contra las lesiones gástricas inducidas por EtOH en ratas.

Muestras de prueba Dosis por vía oral (mg / kg) Índice de úlcera (media ± SEM) Prevención de la úlcera a Inhibición (%)
Administración aguda
Controlar 91.5 ± 13.8
Miel 250 69.3 ± 17.7 0/6 24.3
Mezcla de polen de miel y abeja 250 113.9 ± 37.6 0/6
Misoprostol 0.4 0 ± 0 * 6/6 100.0
Administración subaguda
Controlar 101.1 ± 31.8
Miel 500 60.2 ± 19.3 0/6 40.5
Mezcla de polen de miel y abeja 500 32.8 ± 12.7 0/6 67.6
Misoprostol 0.4 0 ± 0 ** 6/6 100

* p <0.05; ** p <0.01 significativo del control; SEM, promedio de error estándar.

a Número de estómagos completamente evitados de cualquier hemorragia o lesión.

Con el fin de evaluar los posibles efectos antihepatotóxicos y antioxidantes de la formulación de HBM y la miel, se utilizó el modelo de lesión hepática inducida por paracetamol en ratones. Como se muestra en la Tabla 4 , el nivel de peroxidación lipídica tisular (35.4%) en los hígados de animales del grupo acetaminofeno, como se evidencia por la determinación de TBARS, aumentó significativamente en comparación con el grupo control, mientras que el contenido de GSH en hígado disminuyó (15.5%). La formulación de HBM administrada en dosis de 500 mg / kg redujo el aumento inducido por paracetamol en el nivel de TBARS en el hígado aproximadamente 34.5%. Por otro lado, en ambas muestras de prueba, se encontró que la formulación de HBM y la miel eran completamente ineficaces en la normalización de la reducción inducida por paracetamol de los niveles de GSH hepático y, de hecho, empeoraron la situación.

Tabla 4.  Efecto de la mezcla de polen de miel y abeja sobre los niveles de TBARS y GSH contra la hepatotoxicidad inducida por paracetamol.

Muestras de prueba Dosis por vía oral (mg / kg) Tissue TBARS (nmol / g en peso húmedo) % cambio c Tejido GSH (mol / g) % cambio c
Control (vehículo) 312 ± 28.2 64.9 ± 4.9
Acetaminofeno a 600 422.5 ± 37.6 * +35.4 54.9 ± 3.5 * -15.5
Miel b 500 319.8 ± 25.3 * -24.3 33.2 ± 2 * -39.5
Honey-bee mezcla polen b 250 354.8 ± 32.2 * -16 43.3 ± 3.7 * -21.1
500 276.7 ± 16.6 * -34.5 34.7 ± 1.9 * -36.8

Los resultados se expresaron como media ± SEM.

a Comparado con el control del vehículo (0.5% CMC).

b Comparado con acetaminofén.

c (+) representa el porcentaje de aumento y (-) representa la disminución en cada valor cuando se compara con cualquier vehículo (para acetaminofeno) o paracetamol (para muestras de prueba).

* p <0.001 significativo del control (para acetaminofeno) o paracetamol (para muestras de prueba).

Anteriormente se informó que la composición química y la capacidad antioxidante de los productos de miel dependían en gran medida de la fuente de la planta, los factores geográficos, estacionales y ambientales, así como las técnicas de procesamiento empleadas en la preparación. Entre los componentes de los productos de miel, el contenido total de ácido fenólico (ácido cafeico, ácido ferúlico) y flavonoide se determina como la indicación de varias actividades biológicas que se atribuyen a estos productos (es decir, actividad antioxidante antimicrobiana) ( Wahdan, 1998).Wahdan A (1998) : causas de la actividad antimicrobiana de la miel. Infección 26: 26 – 31 . Al-Mamary et al., 2002Al-Mamary M , Al-Meeri A , Al-Habori M (2002) : actividades antioxidantes y compuestos fenólicos totales de diferentes tipos de miel . Nutrition Res 22: 1041 – 1047 .Aljadi y Kamaruddin, 2004Aljadi AM , Kamaruddin MY(2004) : Evaluación de los contenidos fenólicos y las capacidades antioxidantes de dos mieles florales malasias . Food Chem 85: 513 – 518 .Meda et al., 2005Meda A , Lamien CE , Romito M , Millogo J , Nacoulma OG (2005) : Determinación de los contenidos fenólicos totales, flavonoides y prolina en la miel de Burkina Fasan, así como su actividad de eliminación de radicales . Food Chem 91: 571 – 577 . En el presente estudio, el contenido total de ácido fenólico y flavonoide de la formulación de HBM y muestras de miel pura se midieron y compararon mediante el uso de reactivos de Folin-Ciocalteu y cloruro de aluminio. Los contenidos fenólicos totales de la formulación de HBM y la miel fueron 145 ± 2.3 y 50.3 ± 0.9 mg GAE / 100 g de miel, respectivamente. Por otro lado, el contenido total de flavonoides de estas muestras fue de 59.3 ± 2.7 y 17.7 ± 0.3 mg QE / 100 g de miel, respectivamente. Estos resultados revelaron que la formulación de HBM posee contenidos fenólicos y flavonoides totales más altos en comparación con la muestra de miel pura ( Tabla 5 ). Los estudios han demostrado que la composición de compuestos fenólicos varía según el origen del polen de abeja. Campos y sus colegas ( Campos et al., 1997)Campos M , Markham KR , Mitchell KA , Cunha AP (1997) : un enfoque para la caracterización del polen de abeja a través de sus perfiles flavonoides / fenólicos . Phytochem Anal 8: 181 – 185 . realizaron un estudio comparativo sobre los perfiles flavonoides / fenólicos del polen de abeja de Portugal y Nueva Zelanda mediante cromatografía líquida de alta resolución. Los principales flavonoides fueron quercetina, kaempferol y glucósidos de miricetina, mientras que los principales ácidos fenólicos fueron derivados del ácido hidroxicinámico. En consecuencia, sugirieron que la comparación de los perfiles fenólicos sería un parámetro útil para la evaluación de la calidad del polen de abeja. En términos de la disponibilidad de los hidrógenos fenólicos como captadores de radicales donantes de hidrógeno, los compuestos fenólicos poseen una potente capacidad antioxidante y, en consecuencia, una parte de las propiedades terapéuticas de los productos de abejas se puede atribuir a su capacidad antioxidante ( Buratti et al., 2007)Buratti S , Benedetti S , Cosio MS(2007) : Evaluación del poder antioxidante de la miel, el propóleo y la jalea real mediante análisis de inyección de flujo amperométrico . Talanta 71: 1387 – 1392 .

Tabla 5.  Contenido fenólico y flavonoide total de la mezcla de polen de miel y abeja y miel.

Muestras de prueba Contenido fenólico total (mg GAE / 100 g de miel ± SEM) Contenido total de flavonoides (mg QE / 100 g de miel ± SEM)
Miel 50.3 ± 0.9 17.7 ± 0.3
Mezcla de polen de miel y abeja 145 ± 2.3 59.3 ± 2.7

GAE, equivalente de ácido gálico; QE, equivalente de quercetina; SEM, error estándar medio; n = 3.

Los resultados han demostrado claramente que la combinación de miel con polen de abeja (proporción de 4 a 1, respectivamente) ha aumentado el contenido total de fenol y flavonoides a concentraciones tres veces mayores. En consecuencia, se observaron actividades antinociceptivas, antiinflamatorias y antioxidantes más altas para la formulación de HBM en comparación con las de la miel pura. El efecto de HBM fue dosis-dependiente y la formulación ejerce un efecto significativo a dosis más altas. Los resultados experimentales confirman que la formulación de HBM puede ser beneficiosa contra los trastornos inflamatorios, en particular en el dolor reumático y ciático, así como en las patologías donde los tratamientos con antioxidantes o antilipidperoxidantes pueden ser útiles. Sin embargo, la miel y la formulación de HBM mostraron un efecto débil en las úlceras pépticas, por lo tanto, solo podrían recomendarse como una terapia complementaria en el tratamiento farmacológico.

Oryan y Zaker (1998)Oryan A , Zaker R (1998) : Efectos de la aplicación tópica de miel sobre la curación de heridas cutáneas en conejos . Zentralblatt für Veterinarmedicine A 45: 181 – 188 .  también observó que la miel tras la aplicación externa sobre heridas disminuía la respuesta inflamatoria, es decir, menos edema, menos infiltración mononuclear y granular, menos necrosis, y proporcionaba una mejor contracción de la herida y concentraciones más bajas de glucosaminoglucano y proteoglucano. Al-Waili y Boni (2003)Al-Waili NS , Boni N (2003) : La miel natural reduce la concentración plasmática de prostaglandinas en individuos normales . J Medicinal Food 6: 129 – 135 . informaron que la miel natural inhibe las concentraciones de prostaglandinas en diversos fluidos biológicos, como el plasma y la orina. Dado que las prostaglandinas son mediadores bien conocidos del dolor y la inflamación, las actividades antinociceptivas y antiinflamatorias de la miel y la formulación de HBM pueden deberse a esta vía. Por otro lado, el efecto inhibidor de la prostaglandina de la miel puede explicar el efecto débil de la miel y la formulación de HBM en el modelo de úlcera péptica, ya que las prostaglandinas constituyen el constituyente principal del revestimiento interno de la mucosa gástrica. Sin embargo, en estudios previos de Ali (1991)Ali AT (1991) : Prevención de lesiones gástricas inducidas por etanol en ratas por la miel y su posible mecanismo de acción . Scand J Gastroeneterol 26: 281 – 88 .Ali AT (1995) : la miel natural ejerce su efecto protector contra las lesiones gástricas inducidas por el etanol en ratas al evitar el agotamiento del sulfhidrilo no proteico glandular. Trop Gastroeneterol 16: 18 – 26.  se ha informado que la miel natural proporcionó una protección significativa contra las lesiones gástricas agudas y crónicas inducidas por el etanol en ratas, posiblemente mediante la prevención del agotamiento de sulfhidrilos no proteicos glandulares.

Aunque el efecto de la miel en las enfermedades infecciosas no se investigó en el presente estudio, estudios previos han demostrado que la miel ejerce una amplia gama de actividades antimicrobianas, contra diversas bacterias patógenas humanas Gram-negativas y Gram-positivas y Candida albicans ( Al-Waili & Saloom, 1999Al-Waili NS , Saloom KY (1999) : Efectos de la miel tópica en infecciones de heridas postoperatorias debidas a bacterias Gram-positivas y Gram-negativas después de las cesáreas y las histerectomías . Eur J Medical Res 26: 126 – 130 . y antileishmanial (Zeina et al., 1997)Zeina B , Zohra I , Al-Assad S(1997) : Los efectos de la miel sobre los parásitos leichmania: Un estudio in vitro . Doctor tropical 27: 36 – 38 .  y actividades antivirales (Herpes simplex(Al-Waili, 2004)Al-Waili NS (2004) : aplicación tópica de miel versus aciclovir para el tratamiento de lesiones recurrentes de Herpes simplex . Medical Science Monitor 10: MT 94 – 98 . y el virus de la rubéola (Zeina et al.,1996)Zeina B , Othman O , Al-Assad S(1996) : Efecto de la miel versus tomillo en la supervivencia del virus de la rubéola in vitro . J Altern Complement Med 2: 245 – 248 .  Por otro lado, el efecto de HBM sobre los trastornos inmunes puede ser respaldado por el estudio deAl-Waili (2001).Al-Waili NS (2001) : Efectos de la miel sobre la respuesta inmune primaria y secundaria debido a antígenos timo-dependientes y timo-independientes . Hematol J 1: 161S – 165S .  que informó el efecto inmunoestimulador de la miel natural, mediante el aumento de la producción de anticuerpos contra los antígenos timo-dependientes y timo-independientes durante las respuestas inmunes primarias y secundarias.

En conclusión, los resultados experimentales han demostrado que la combinación de miel con polen de abeja ha aumentado significativamente el potencial de curación de la miel y, de forma inferencial, la formulación de “mezcla de polen de miel y abeja” puede tener efectos beneficiosos contra las enfermedades inflamatorias, inmunes e infecciosas sugeridas por los distribuidores de hierbas . Por otro lado, no encontramos ninguna evidencia científica que respalde suficientemente el efecto curativo de la mezcla HBP sobre la úlcera péptica.