EFECTOS INMUNOMODULADORES DEL VENENO DE ABEJA EN LA LÍNEA CELULAR DE FIBROBLASTOS SINOVIALES HUMANOS

 La artritis reumatoide (AR) es una enfermedad inflamatoria crónica bien conocido asociado con hiperplasia de las células en los fluidos sinoviales. La AR se caracteriza por la proliferaciónde sinoviocitos que producen citoquinas pro-inflamatoria que son importantes en la patogénesis de AR. Durante la hiperplasia sinovial los sinoviocitos similares a fibroblastos, efectores clave que conducen a la destrucción del cartílago en la articulación inflamada, liberan una gran cantidad de citocinas y quimiocinas (pro-inflamatorias  ), entre los cuales, IL-1β es la citocina más importante implicada en el proceso de la inflamación en la AR .
  • SIRT1, un homólogo de mamífero para el regulador 2 (SIR2), es una desacetilasa dependiente de NAD + que pertenece al grupo III de la histona desacetilasas. Desempeña un papel clave en muchos procesos patológicos, incluyendo el envejecimiento, la resistencia al estrés, apoptosis, inflamación y la autoinmunidad. La función de SIRT1 participa principalmente en la desacetilación de las histonas y numerosos factores de transcripción importantes, incluyendo el factor nuclear-kB (NF-kB). En una investigación previa, SIRT1 se encontró que está    sobreexpresada en los tejidos sinoviales y células de pacientes con AR. Además, SIRT1 actua como una proteína pro-inflamatoria en células sinoviales de pacientes con AR .
  • La terapia con BV se ha usado en la medicina tradicional para el tratamiento de la artritis durante mucho tiempo. Los efectos anti-artritis del BV se han reportado en varios modelos de artritis. La inhibición del factor nuclear kappa B (NF-kB), un factor de transcripción crítico responsable de la regulación de la inflamación, se atribuye a la melitina como constituyente principal del BV. Disminución en la producción de citoquinas pro-inflamatorias (TNF-α, IL-6 e IL-1β),y de  las enzimas ciclooxigenasa y la fosfolipasa, y las especies reactivas de oxígeno (ROS) que se asocia con los efectos anti-artritis del BV han sido reportados. También se ha informado de la inducción de la apoptosis en fibroblastos sinoviales reumatoides humanos.
  •  Uno de los componentes más importantes de la capa íntima del revestimiento de la membrana sinovial sana, son los fibroblastos (FLS). Una de las características patológicas importantes de FLS es su capacidad para secretar citocinas como IL-1. De hecho, la proteína y la expresión génica SIRT1 se incrementa en tejidos y células de los pacientes con AR lo que sugiere un papel importante para SIRT1 en la patogénesis de la AR .
  • La idea detrás de la investigación actual es encontrar una relación entre el factor de riesgo más importante de la enfermedad de la artritis reumatoide y la respuesta inflamatoria en FLS normales usando análisis de la expresión génica. Para lograr este objetivo, la expresión de citoquinas inflamatorias IL-1 y SIRT1  fueron evaluados cuantitativamente en tiempo real PCR. La expresión génica de FLS obtenida a partir de pacientes con AR distorsiona significativamente en los pasajes más altos. Es por ello que se ha investigado los patrones de expresión génica con el Mycoplasma, es un microorganismo que en algún momento contamina los bancos de células y afecta a la expresión de algunos genes y proteínas. Sorprendentemente, este microorganismo algunas veces se ha definido como una causa del desarrollo AR . Es por eso que tuvimos que revisar habitualmente las células FLS utilizando la prueba más fiable de PCR aplicado para este tipo especial de contaminación.
  • La primera descripción de la asociación entre el humo del cigarrillo y AR se remonta a 1987  El humo del cigarrillo es una mezcla compleja que contiene más de 4000 sustancias químicas, incluyendo algunos agentes inflamatorios. También se ha demostrado que la CSC regula la expresión de genes de algunas citoquinas inflamatorias, incluyendo IL-1β . 3-metilcolantreno, benzo [a] pireno, y 2,3,7,8-tetraclorodibenzo-p-dioxina, son algunos de los ingredientes del humo del cigarrillo. La expresión de IL-1β se ha demostrado estar aumentado por estos productos químicos en paciente RA derivada línea humana antígeno transformadas en SV40 T similar a fibroblastos de sinoviocitos MH7A. En el presente estudio un aumento dependiente de la dosis se observó para la IL-1β del ARNm. Inducida por LPS la producción de la prostaglandina E2 y de óxido nítrico disminuyeron en células RAW 264.7. Hasta ahora, dos conjuntos de resultados completamente diferentes se han reportado en el papel de SIRT1 en la inflamación; algunos investigadores han informado de un papel anti-inflamatorio de esta proteína y otros informaron de una función completamente diferente para Sirt1. Las conclusiones de la primera se basaba en la activación de SIRT1 por el resveratrol y la reducción de la respuesta inflamatoria en los fibroblastos o línea celular humana reumatoide, MH7A. Este último obtiene la misma respuesta mediante el uso de diferentes inhibidores de sirtuinas. Además, la sobreexpresión de SIRT1 se ha demostrado que tiene efectos anti-apoptóticos y pro-inflamatorias en FLS, mientras que  suprime el NF-B y la inflamación en los osteoclastos. Esta inconsistencia nunca se ha visto antes en otras condiciones inflamatorias crónicas como la EPOC, donde sólo se ha reportado la función antiinflamatoria de SIRT1. Aunque la función exacta de SIRT1 en la inflamación aún no está clara, los resultados del presente estudio apoyan los efectos proinflamatorios de esta histona deacetilasa, no se detectaron cambios significativos cuando FLS se expuso a diferentes concentraciones de CSC. El resultado fue diferente cuando se utilizaron células MonoMac6 de pacientes con EPOC, en el que CSC disminuyó el nivel SIRT1 de una manera dependiente de la dosis. Nuestros datos muestran que con una excepción, la tendencia para SIRT1, mRNA es el mismo que IL-1β, mRNA; las concentraciones más bajas de BV aumenta los niveles de transcripción de SIRT1 , pero las concentraciones más altas de BV los disminuye. Se puede interpretar como los efectos inmunomoduladores del BV sobre la respuesta inmune en FLS y este informe puede confirmar los efectos terapéuticos del BV en AR y otra trastornos relacionados con el sistema inmune