EFECTOS ANTI-ALÉRGICOS Y ANTIINFLAMATORIOS IN VITRO E IN VIVO DE EBV, UN DERIVADO RECIENTEMENTE DESARROLLADO DE VENENO DE ABEJA, A TRAVÉS DE LA MODULACIÓN DE LA RUTA DE SEÑALIZACIÓN IRF3 EN UN MODELO DE EDEMA INDUCIDO POR CARRAGENINA

Hwa-Jin Chung, Jinho Lee, Joon-Shik Shin, Me-riong Kim, Wonil Koh, Min-Jeong Kim, Jae-woong Lee, Eun Jee Kim, En-Hee Lee, Ganó Kyung Kim, Yoon Jae Lee, Sang Kook Lee, In-Hyuk Ha

El término alergia se refiere a una reacción de hipersensibilidad inmunológica a los antígenos (conocido como alérgenos ) que se produce cuando el sistema inmune es disfuncional ya sea por causas congénitas o adquiridas. Tras la respuesta inflamatoria o alérgica, macrófagos activados por antígenos presentes, secretan citoquinas inflamatorias tales como TNF-α, IL-4, MCP-1, IL-8 e IL-13. Estas citoquinas conducen a la respuesta inflamatoria a través de la diferenciación y maduración de otras células pro-inflamatorias y síntesis de inmunoglobulinas, resultando en aún másinflamación alérgica .

La inflamación es un mecanismo de autodefensa fisiológica que se activa a través de daño sistémico o local que puede ser causado por diversos factores y generalmente se clasifica como aguda o crónica.

Durante el proceso inflamatorio, LPS se une al complejo de Toll-like receptor-4 (TLR4) y la diferenciación mieloide proteína-2 (MD-2), lo que induce la respuesta inflamatoria en los macrófagos. Activado TLR4 entonces transmite señales aguas abajo a través de la diferenciación mieloide factor de 88 (Myd-88) ruta dependiente y proteína adaptadora que contiene TIR-dominio, induciendo la activación del IFN-β (TRIF) ruta dependiente. En la vía TRIF-dependiente, el interferón fosforilado factor regulador 3 (IRF3) se transloca al núcleo y se une a la región promotora, hasta la regulación de la expresión de ARNm de IFN de tipo 1. En consecuencia, el IFN tipo 1 se une a quinasas de Janus (JAK) y fosforila transductor de señal y activador de la transcripción-1 (STAT1), y STAT1 fosforilada, a su vez, se transloca al núcleo y actúa como un factor de transcripción que promueve la expresión de tales factores inflamatorios como NO y PG. Por lo tanto, la modulación de dichas vías a través de la supresión de mediadores inflamatorios específicos puede ser considerado en enfoques de tratamiento a la enfermedad inflamatoria .

Cuando se activan, los mastocitos expresan y liberan citoquinas inflamatorias, que a su vez modulan el proceso inflamatorio. IL-1β activa los mastocitos a través de la mediación de IgE e induce a las células para liberar histamina y citocinas Th2, lo que contribuye a la progresión de la inflamación alérgica mediada por IgE. TNF-α es una citoquina pro-inflamatoria que se libera durante la fase temprana de la respuesta inmunológica y se sabe que está implicada en la modulación de la inflamación alérgica. IL-4 potencia la síntesis de IgE e induce tipo inmediato 1 reacciones alérgicas ayudando a las células B se transforman para expresar IgE, y hasta la regulación de IL-5, que es crucial para la diferenciación de eosinófilos. Mientras que la secreción y la expresión de ARNm de TNF-α e IL-4 en las células RBL-2H3 estimuladas con compuesto 48/80aumentaron significativamente, se mostró la expresión en células pretratadas con BV antes de la estimulación del compuesto 48/80 ser significativamente menor que el control.

La activación de los macrófagos en la inflamación alérgica y el consecuente efecto sobre el NO como mediador que es de la inflamación se investigaron en el estudio actual. En el ensayo de iNOS,elBV se encontró que inhibe la generación de NO de una manera dependiente de la dosis, y el ensayo MTT confirmó que el resultado no fue debido a la citotoxicidad significativa. Además, el BV suprimió la expresión de iNOS y COX-2. Las citoquinas pro-inflamatorias tales como TNF-α e IL-1β son regulados durante la respuesta inflamatoria, y también fueron suprimidos por el BV en una manera dependiente de la dosis.NF-kappa B se conoce como el factor de transcripción nuclear que regula mediadores inflamatorios tales como iNOS, COX-2, y TNF-α. Cuando está inactivo, NF-kappa B permanece en el citoplasma como un heterodímero que consiste en subunidades p50 y p65, unidas a I? B, el inhibidor de la proteína NF-? B. Cuando NF-KB es activado por estimulantes tales como LPS, la fosforilación y degradación de I? B permite NF-kappa B se convierta en activo y se translocan en el núcleo, posteriormente actuar como un factor de transcripción. Los resultados del análisis de Western revelaron que el BV suprimía la degradación de IκB y la translocación intranuclear de p50 y p65. El BV también inhibió el aumento estimulado por LPS de la actividad transcripcional de NF-κB de una manera dependiente de la dosis.

Además, el efecto inhibidor de el BV en la transcripción mediada por NF-KB se examinó en lo que respecta a la vía TRIF-dependiente.  El BV inhibe lafosforilación de IRF3, la señal de aguas abajo de la vía TRIF-dependiente, que conduce a la expresión regulada hacia abajo de IFN-β, la transcripción por la cual se inicia el fosforilado de IRF3. Además, la fosforilación de STAT1 y STAT3, la secuela de IFN-β, también fue suprimida por el BV.

La inflamación aguda se acompaña de síntomas característicos tales como edema, dolor y pérdida de función. Cambio edematoso es uno de los indicadores primarios de la respuesta inflamatoria. Un modelo de edema agudo de la pata inducido por carragenina se estudió para el objetivo de explorar más el potencial antiinflamatorio del BV in vivo. Se encontró que el BV suprimió significativamente proteínas tales como iNOS, COX-2, TNF-α, e IL-1β en el tejido local. Por otra parte, los niveles séricos de PGE2, TNF-α e IL-1β se redujeronreguladas por el tratamiento con BV. Estos resultados implican que el BV ejerce efectos antiinflamatorios potentes .

En conclusión, se demostraron los efectos antialérgicos y antiinflamatorios del BV usando modelos inflamatorios alérgicos invitro e in vivo . Se descubrió que el BV eliminado por alérgenos ejerce un potencial antialérgico, y se puede conjeturar que el BV muestra un efecto antiinflamatorio a través de la regulación de la ruta de señalización de IRF3 y sus factores descendentes.

El BV suprime el compuesto 48 /80 y la expresión del  factor de necrosis tumoral-α (TNF-α) y la interleucina-1β (IL-1β) en células RBL-2H3. El BV también suprimia la producción de óxido nítrico (NO) por la expresión de ARNm abajo de la regulación y expresión de proteínas posterior de mediadores inflamatorios en células RAW 264.7 inducidos por LPS. La fosforilación de activadores y transductores de señales de transcripción 1 / interferón factor regulador 3 (STAT1 / IRF3) se atenuó mediante tratamiento con BV. El BV inhibió significativamente el edema agudo inducido por carragenina en vivo. Los niveles séricos de la prostaglandina E2 (PGE2), TNF-α e IL-1β también se regularon hacia abajo por el BV.

Conclusiones

Estos resultados demuestran que el BV inhibe la respuesta alérgica e inflamatoria al reducir la producción de mediadores inflamatorios a través de la regulación de la vía de señalización STAT1 / IRF3