EFECTO ANTIARTRÍTICO DEL VENENO DE ABEJA: INHIBICIÓN DE LA GENERACIÓN DE LA INFLAMACIÓN MEDIADA POR LA SUPRESIÓN DE NF-KAPPA B MEDIANTE LA INTERACCIÓN CON LA SUBUNIDAD P50

La inactivación Target de NF-? B mediante la unión directamente a la subunidad p50 es un mecanismo importante de los efectos antiartríticos del BV.

La artritis reumatoide (AR) es una enfermedad crónica, destructiva inflamatoria caracterizada por la liberación de numerosos mediadores proinflamatorios tales como las prostaglandinas (PGs) y óxido nítrico (NO). PGs han demostrado que aumenta la fosfolipasa citosólica A 2(la cPLA 2 ) y los niveles de la ciclooxigenasa (COX), y de ese modo amplificar su propia producción y aumentar la síntesis de las citoquinas inflamatorias. Los niveles elevados de PGs se encontraron en células sinoviales tratadas con mediadores de la inflamación o en pacientes con AR. En macrófagos activados, grandes cantidades de NO son generados por la NO sintasa inducible (iNOS). Muchos efectores de producción de NO producen  la liberación simultánea de otros mediadores de la inflamación, tales como la prostaglandina E 2(PGE 2 ) y la prostaglandina I 2 , de la vía de la COX , y la inducción de iNOS pueden ser modificados por la cPLA 2 . Estos efectos sinérgicos pueden ser un mecanismo operativo entre iNOS y COX-2, así como entre iNOS y la cPLA 2 , por el cual las respuestas fisiológicas o patológicas se amplifican en la reacción inflamatoria. El calcio intracelular también juega un papel fundamental, ya que está implicado en la generación del anión superóxido y el NO, la producción de factor de necrosis tumoral α (TNF) , y la cPLA 2 liberación mediada del ácido araquidónico. Por lo tanto, los elementos que pueden suprimir la generación de estos mediadores y agentes que reducen los niveles de calcio intracelular pueden ser utilizados como terapias en el tratamiento de la artritis.

Estos genes inflamatorios representativos (COX-2, CPLA 2 , iNOS y TNF) parecen estar altamente regulados por varios  factores de transcripción, en particular NF-kappa B, que se expresa de forma ubicua y puede ser activado por varias  enfermedades inflamatorias y estímulos patológicos incluyendo citoquinas, estrés oxidativo, la luz ultravioleta, y productos bacterianos y virales. Por consiguiente, los agentes que modulan la actividad de NF-kappa B tienen un efecto pronunciado sobre iNOS, COX-2, y la cPLA 2  en respuesta a diferentes estímulos inflamatorios. Varios estudios han demostrado que los agentes que inhiben la activación de NF-? B pueden ser posibles tratamientos para enfermedades antiinflamatorios.

El veneno de abeja (BV) contiene una variedad de diferentes péptidos, entre ellos la melitina (un componente principal de BV), apamina, adolapina, y el péptido desgranulador de mastocitos . Estudios han demostrado que la terapia con BV atenúa la AR en seres humanos y en los animales experimentales  y que el BV tiene un efecto antiinflamatorio.

Para obtener una mejor comprensión de los mecanismos moleculares, lo primero que se ha reevaluado son los efectos antiartríticos del BV en modelos de artritis de rata, y luego se investigaron los mecanismos antiartríticos del BV y la melitina en una línea celular de macrófagos murinos (RAW 264.7) y en sinoviocitos obtenidos a partir de pacientes con AR. Nos centramos en el blanco de interrupción de NF-KB por el BV o melitina como un posible mecanismo de los efectos antiinflamatorios.

Para obtener una mejor comprensión de los mecanismos moleculares de los efectos antiinflamatorios del BV en la AR, se evalúa el efecto inhibidor del BV en un modelo de rata de la AR aguda y crónica. De acuerdo con otros hallazgos, el efecto antiartrítico del BV también se encontró en el presente estudio. El tratamiento con BV dio como resultado una gran reducción en la inflamación del tejido y la formación de osteofitos en el modelo de la artritis crónica, así como la formación de edema en el modelo de artritis aguda. La acción inhibidora del BV en la generación de mediadores de la inflamación también fue eficaz en sinoviocitos de pacientes con AR. El efecto inhibidor del BV fue consistente con la de un conocido inhibidor de la COX-2, la indometacina. Así, los efectos inhibidores del BV en la reacción inflamatoria en AR pueden deberse, al menos en parte, a la inhibición de COX-2. En la artritis inflamatoria, también ha habido evidencia que indica que los tejidos afectados producen grandes cantidades de NO que podrían actuar como un agente proinflamatorio causando un daño tisular. A este respecto, el efecto reductor del BV en NO también puede contribuir al efecto antiartrítico del BV. NO también puede influir en las acciones de TNF, que está implicado de manera significativa en la afluencia de células inflamatorias, la erosión del cartílago articular y la destrucción ósea en la artritis inflamatoria. El BV presenta importantes efectos inhibidores sobre la generación de mediadores de la inflamación, incluyendo TNF. También se encontró que el BV tiene un efecto inhibidor sobre la generación inducida por LPS de especies reactivas de oxígeno (ROS), así como la liberación de calcio. Por lo tanto, los efectos antiartríticos de BV pueden estar relacionados con los múltiples efectos inhibitorios sobre la generación de mediadores de la inflamación tales como PGE 2 , NO, y TNF, así como sobre la liberación de ROS y calcio intracelular .

NF-kappa B es uno de los reguladores más importantes de la expresión de genes proinflamatorios, tales como COX-2, la cPLA 2, iNOS y TNF. En el presente estudio, se ha demostrado que el  BV inhibe la unión del ADN y la actividad transcripcional de NF-? B de una manera dependiente de la dosis tanto en las células RAW 264.7 como en sinoviocitos. Este efecto también se encuentra en las células THP-1, lo que sugiere que el efecto inhibidor de BV puede no ser específico de célula. La región promotora del gen murino que codifica iNOS y COX-2 contiene sitios de unión de NF-kappa B. El efecto inhibidor fue consistente con la reducción de la liberación de I? B detectado en el citosol por la supresión de la fosforilación de I? B, y la disminución de la translocación de la subunidad p50 de NF-kB, pero no p65.

El inhibidor de fosfatasa específica H-7 invierte este efecto inhibidor del BV.

Estos resultados sugieren que el BV o la melitina inhibieron la actividad de unión al ADN de NF-? B a través de la inhibición de la fosforilación de I? B, inhibiendo de ese modo la translocación de p50, lo que resulta en la reducción de la expresión de genes inflamatorios. Nuestros datos muestran el efecto inhibidor del BV o melitina en apoyo de dos perspectivas posibles de generación de ROS inducida por LPS. El equilibrio redox celular ha demostrado ser un factor crítico en la activación de NF-? B a través de la interrupción de las vías que implican ya sea p50 de unión por una parte homodímero-ADN, o la fosforilación de I? B en el otro.

Hemos encontrado que la melitina se recogió en las células y se transloca al núcleo, donde se transloca p50 cuando se activa NF-KB. Por lo tanto, es posible que el BV o melitina se une directamente a p50, ya sea en el citosol o en el núcleo, lo cual inhibe la activación de NF-KB.

La estructura radiográfica de p50 ha demostrado la presencia de residuos de cisteína, que son críticos para las interacciones óptimas de ADN-proteína, y los residuos de cisteína de p50 se han considerado para ser una diana para la regulación redox. Otras pruebas demuestran que la TDT invierte la capacidad de p50 para unirse al elemento de ADN de NF-? B, así como la unión directa de la melitina. Estos resultados muestran que el BV o melitina pueden modificar un grupo sulfhidrilo de la proteína p50, lo que obstaculiza afinidad p50 al elemento de unión a ADN de NF-? B.

Actualmente se está realizando un experimento para identificar el sitio de unión de p50 con melitina. Ha habido búsquedas intensivas para las moléculas que inhiben la activación de NF-KB segun diversos modos de acción. El presente estudio demuestra que la inhibición de la activación de NF-KB por el BV, a través de la capacidad directa del BV y / o la melitina de unirse a p50, puede ser un mecanismo molecular importante en el efecto supresor del BV en reacciones inflamatorias. La potencia del BV (o melitina) en la inhibición de la respuesta inflamatoria puede ser de gran beneficio en enfermedades degenerativas e inflamatorias tales como AR.