EFECTOS DE LA SUPLEMENTACIÓN DE LA JALEA REAL EN LAS CÉLULAS T REGULADORAS EN LOS NIÑOS CON LES

Asmaa M. Zahran ,  Khalid I. Elsayh ,  Khaled Saad ,  Esraa MA Eloseily ,  Naglaa S. Osman ,  Mohamd A. Alblihed , Gamal Badr ,  yMohamed Mahmoud H.

Abstracto
El lupus eritematoso sistémico (LES) es una enfermedad autoinmune común caracterizada por T- anormal y la activación de células B, trastornos de citoquinas, y la producción considerable de autoanticuerpos . A pesar de los mecanismos centrales de tolerancia, algunas células T que reconocen autoantígenos se liberan en la periferia. Uno de los mecanismos utilizados para eliminar o controlar estas células potencialmente dañino es células T reguladoras (Tregs). Un número de células T reguladoras inmunes se han descrito . CD4 + células T reguladoras juegan un papel importante en el mantenimiento de la tolerancia periférica y se caracterizan por la expresión del marcador de superficie CD25 y la proteína caja forkhead factor de transcripción 3 (FOXP3), por lo que hasta el 5-10% de la normal de CD4 + T- población de células. La abrogación de desarrollo Tregs CD4 y / o función periférico puede causar enfermedades autoinmunes .
CD8 + CD25 + FOXP3 + células T con función reguladora en el mantenimiento de la auto-tolerancia han sido identificadas y pueden ser generados por estimulación antigénica continua. CD8 Humanos + Tregs están implicados en trastornos autoinmunes: Esclerosis múltiple y la enfermedad inflamatoria intestinal . Supresiva CD8 Tregs aparece después de la estimulación del receptor de células T, la supresión de la proliferación celular de CD4 + células T ingenuas y efectoras a través de la lisis de contacto célula-célula o factores solubles como interleucina (IL) 10 y factor de crecimiento transformante beta (TGF-β). CD8 células T reguladoras tienen la capacidad supresora típicamente asociados con CD4 + células T reguladoras. La interacción entre los subconjuntos de células T reguladoras que protegen contra las enfermedades autoinmunes sigue sin estar clara. CD8 FOXP3 que expresan + células T demostraron vital para CD4 + CD25 + células T reguladoras inducida por un péptido tolerogénico para suprimir lupus murino .
La apoptosis es una muerte celular programada y, normalmente, las células apoptóticas resultado son eliminados por los fagocitos. Si no se retiran los cuerpos apoptóticos conduce a la liberación de autoantígenos que pueden inducir autoinmunidad. Aumento de la apoptosis de linfocitos se encuentra que es parte de la patogénesis de SLE. Los estudios en humanos LES han puesto de manifiesto el aumento de la apoptosis de los linfocitos y los defectos en la eliminación de los macrófagos de células apoptóticas .

La jalea real (RJ) es un producto cremoso secretada por las abejas obreras jóvenes enfermera ( Apis mellifera ), y que se sintetiza en las glándulas mandibulares y la hipofaringe. RJ comprende 60-70% de agua, 10-12% de carbohidratos, 12-15% de proteínas y 3-7% de lípidos. Basado en la composición única de RJ, recientemente in vivo y in vitro estudios se centraron en sus características de promoción de la salud tales como hipotensor, anti-hipercolesterolemia, anti-inflamatorio, antitumoral, antioxidante y efectos de control de peso y propiedades inmunomoduladoras . Las propiedades inmunomoduladoras se aprobaron en estudios con animales de SLE, como la administración RJ a los ratones causó una disminución significativa en el nivel en suero de IL-10 y en las autoanticuerpos contra ácido desoxirribonucleico de cadena sencilla (ssDNA), ácido de doble hebra desoxirribonucleico (dsDNA) y eritrocitos, así como una reducción en el número de células B autorreactivas esplénicas . La hipótesis de que RJ tiene un papel en el control de la actividad de la enfermedad del lupus eritematoso sistémico a través de su efecto inmunomodulador de células T reguladoras. Hasta donde sabemos, no hay estudios previos se han centrado en el efecto inmunomodulador de la administración RJ en pacientes con LES en los seres humanos. Nuestro objetivo fue estudiar el efecto de la suplementación RJ en el curso de la enfermedad del lupus eritematoso sistémico pediátrico con algunos marcadores inmunológicos (CD4 y CD8 células T reguladoras) y los linfocitos apoptosis.

Discusión
LES es una enfermedad autoinmune común caracterizada por una regulación anormal inmune y la producción de autoanticuerpos a la auto-nuclear, citoplásmica, y moléculas de la superficie celular con la enfermedad resultante generalizada multisistémica crónica autoinmune inflamatoria . RJ es conocida por tener acciones beneficiosas para la salud multipotentes; los efectos inmunomoduladores en particular, están siendo probados cada vez más en la literatura . RJ se encontró para estimular la producción de anticuerpos y la proliferación de células inmunocompetentes en ratones . Además, RJ se encontró que tienen efectos anti-inflamatorios a través de diferentes mecanismos, uno era debido a la inhibición de la producción de citoquinas proinflamatorias por macrófagos . Además, RJ se sugirió para modular la respuesta inmune en ratas a través de que afecte a sus células dendríticas por su contenido de ácidos grasos . RJ se encontró para suprimir las reacciones alérgicas de tipo I y se asoció con la restauración de la función de los macrófagos y las respuestas de citocinas Th1 / Th2 . RJ también fue encontrado para inhibir el desarrollo de lesiones de la dermatitis atópica como en ratones .

Sobre la base de estas propiedades inmunomoduladoras, RJ fue desafiado de alguna in vivo estudios y animales de enfermedades autoinmunes, y los resultados fueron prometedores. Con respecto a SLE, sólo hay un estudio en animales que exploró este efecto. En un modelo animal de SLE en ratones New Zealand Negro × New Zealand White F1 que genéticamente presentan muchas manifestaciones similares a SLE humano, RJ administración oral demostró un retraso significativo en la aparición de la enfermedad y su progresión activo. Los ratones que recibieron RJ mostró disminución de la proteinuria y una prolongación de la vida útil. RJ causó una disminución significativa en el nivel en suero de IL-10, y en los autoanticuerpos contra ssDNA, dsDNA, y los eritrocitos, así como una reducción en el número de células B autorreactivas esplénicas .
En nuestra cohorte de niños con LES, antes del tratamiento hubo un desequilibrio observada entre CD4 + y CD8 + linfocitos; esto puede explicarse por la desregulación inmune en casos de SLE. Nuestros resultados mostraron que los pacientes con LES (tanto antes como después del tratamiento RJ) tenían porcentajes significativamente más bajos de CD4 + linfocitos frente al grupo control normal. Hay también fue significativamente menor CD4 + / CD8 + proporción de células en los pacientes que los controles. La frecuencia de células CD4 + linfocitos T se incrementó significativamente después del tratamiento RJ frente valor de línea base. Esto no era cierto para CD8 + linfocitos T, ya que no mostró cambios significativos con el tratamiento RJ o cualquier diferencia entre los niños con LES y el grupo de control normal.

Nuestros resultados están de acuerdo con lo encontrado por McInerney et al. ( 19 ) que examinó los niveles y funciones de la sangre periférica inmunorreguladores subpoblaciones de células T en el LES. Ellos encontraron porcentajes normales de CD8 + células T en la sangre periférica en todos los pacientes con LES. Curiosamente, alrededor de CD4 + , se encontraron cerca de la mitad de los pacientes con LES había deprimido notablemente CD4 +niveles de células y, a su vez significativamente más bajos de CD4 +/ CD8 + proporción de células, mientras que la mitad restante de los pacientes tenían niveles normales de CD4 + células (normal CD4 + / CD8 + proporción de células) .
FOXP3 es un factor de transcripción clave que es críticamente importante en el control del desarrollo y la función de Treg. Hay muchos indicios de que FOXP3 está implicada en la patogénesis de enfermedades autoinmunes. En nuestro estudio anterior, encontramos que las células CD4 + CD25 + de alta y CD4 + CD25 + de alta FOXP3 + se redujo significativamente en los linfocitos totales y en las células CD4 + células en el recién diagnosticado diabetes tipo I pacientes pediátricos . Además, en un modelo de ratón (inducida por colágeno) de la artritis reumatoide, la transducción de FOXP3 condujo a la inhibición de la activación de células T y la atenuación de la proliferación celular. Disminuyó IL-2 e interferón (IFN) gamma expresión, y el aumento de IL-10 expresión en CD4 activadas + CD25 – células T. FOXP3 transducidas CD4 + CD25 -células T atenuadas proliferación de las células CD4 + CD25 -células T. Transducción de FOXP3 retrasa notablemente la incidencia de enfermedades y alivia los síntomas autoinmunes de ratones artritis inducida por colágeno .
En este estudio, hemos encontrado que los niños con LES (tanto antes como después del tratamiento RJ) tenían niveles significativamente más bajos de células T CD4 y la expresión de FOXP3 reguladora de CD4 + CD25 + alta en comparación con el grupo control normal. Además, los niveles de CD4 + células T reguladoras y la expresión de FOXP3 se correlacionaron negativamente con la actividad de la enfermedad detectada por SLEDAI. Esto está de acuerdo con Hu et al.  y Lyssuk et al. , que mostraron que el CD4 + células T reguladoras y los niveles de FOXP3 en pacientes con LES fueron significativamente más bajos que los controles normales. Además, encontraron una correlación negativa significativa entre el nivel de células T reguladoras y el índice de actividad de la enfermedad (puntuación SLEDAI). CD4 + se sugiere las células T reguladoras para jugar un papel importante en la patogénesis de SLE . Por el contrario, se ha producido resultados muy contradictorios entre los estudios de CD4 + FOXP3 + células en SLE. Barath et al.  se encuentra la disminución de CD4 + CD25 + FOXP3 + células en el LES sin ninguna correlación con la actividad de la enfermedad. Otros estudios han informado de los valores normales para CD4 +CD25 + FOXP3 + células . Sorprendentemente, otros investigadores han informado de un aumento de porcentajes de CD4 + FOXP3 + en el lupus y se encontró que este resultado correlacionado con actividad de la enfermedad .
El aumento significativo en el nivel de CD4 + células T reguladoras en nuestros pacientes con LES después del tratamiento con RJ puede explicarse por sus efectos inmunomoduladores a través de su capacidad para aumentar la proliferación de células competentes inmunes . También se encuentra para modular la respuesta inmune en ratas a través afecte a sus células dendríticas a través afectar a su contenido de ácidos grasos . Un estudio reciente ha demostrado una sustancia activa especial que sólo existe en RJ que se llama ‘el ácido hidroxi-2-decenohico’. Se encontró para promover el crecimiento de los subgrupos de linfocitos T y la producción de IL-2 . En un modelo animal de SLE, la administración oral de RJ mostró retraso significativo en la aparición de la enfermedad y su progresión activo. En nuestros pacientes, hubo una disminución en la actividad de la enfermedad después de la administración de RJ detectada por SLEDAI. Nuestros pacientes también mostraron una correlación negativa entre la actividad de la enfermedad y CD4 y FOXP3, que puede sugerir que la tasa de aumento de las células T reguladoras tiene un impacto en la disminución de la actividad de la enfermedad. La Cava et al.  demostraron que la producción de autoanticuerpos por células B en pacientes con LES podría ser interrumpido a través de la inducción de células T reguladoras, y las células T reguladoras podría inhibir la producción de anticuerpos dsDNA por las células B a través de la inhibición por contacto celular inducida por TGF unido a la membrana -β y receptor del factor de necrosis tumoral inducida por glucocorticoides (GITR) moléculas.
Las CD8 + células T reguladoras interactúan con las células efectoras de manera significativa, lo que limita la respuesta inmunitaria . La disminución del nivel de CD8 + células T reguladoras en nuestros pacientes antes del tratamiento indica una pobre capacidad de estas células para suprimir las células T autorreactivas en pacientes con LES. También, CD8 + células T reguladoras son esenciales para CD4 + CD25 + funciones reguladoras de células T en la supresión de la autoinmunidad . Esto contribuyó a la desregulación inmune en curso en nuestros pacientes. Después del tratamiento con RJ, el nivel de CD8 + células T reguladoras se incrementó de manera significativa y se convirtió en no significativamente diferente de la de los controles. Esto puede explicarse por el efecto del ácido hidroxi-2-decenoico en la promoción de IL-2. CD8 + células T reguladoras se expanden en respuesta a tratamiento con IL-2 y se pueden caracterizar fenotípicamente y funcionalmente, en el estado estacionario y en IL-2 estimulación. CD8 + células T reguladoras son altamente supresiva y sensible a IL-2 .
La apoptosis es una muerte celular programada, y normalmente las células apoptóticas resultado se eliminan por los fagocitos. Si no se retira cuerpos apoptóticos conduce a la liberación de autoantígenos, que puede inducir la autoinmunidad . Nuestro estudio reveló una frecuencia significativamente mayor en las células CD4 + T las células de la apoptosis, lo que podría explicar la disminución de las células CD4 + células T en los pacientes con LES. Aumento de la apoptosis de linfocitos se encuentra que es parte de la patogénesis de SLE. Los estudios en SLE humana han puesto de manifiesto aumento de la apoptosis y defectos en la eliminación de macrófagos de células apoptóticas de linfocitos, aunque el mecanismo por el que los macrófagos son defectuosos en la eliminación de células apoptóticas aún no está claro. Taylor et al.  encontraron que la deficiencia de complemento puede estar implicado en este proceso. Ren et al. ( 8 ) han demostrado que los macrófagos de pacientes con LES eran menos capaces de ingerir los neutrófilos apoptóticos y que esto era secundario a la presencia o ausencia de factores séricos en lugar de un defecto intrínseco de los macrófagos. Jin et al. ( 32 ) encontraron que la actividad de los macrófagos se aumentó de hecho en el LES en respuesta a un aumento de la apoptosis de linfocitos. Esto fue confirmado por el hallazgo de que los niveles séricos de neopterina e IFN-γ se incrementó en el LES. Además, encontraron que la neopterina una correlación positiva con el aumento del número de linfocitos apoptóticos y la actividad general de la enfermedad LES. Por otra parte, encontraron que la apoptosis de linfocitos y macrófagos aumento de la actividad se correlacionaron con la actividad de la enfermedad.
En relación con el efecto del tratamiento sobre los linfocitos RJ apoptosis en nuestro estudio, encontramos que los apoptóticas CD4 + linfocitos T mostraron una reducción significativa hasta situarse en su cuarta parte de los valores basales antes del tratamiento para los valores más o menos normal como el grupo de control sano. De nuevo, en correlación con los anteriores CD8 + linfocitos T contar, los cambios en CD8 apoptóticas + linfocitos T fueron insignificantes entre pacientes y controles.
I
Conclusión
A lo mejor de nuestro conocimiento, este es el primer estudio en humanos sobre el efecto de la suplementación de RJ en los niños con LES. Nuestros resultados mostraron mejoras con 3 meses de tratamiento RJ en lo que respecta a los clínicos y de laboratorio de puntuación marcadores de gravedad de la enfermedad. En esta etapa, se trata de un único estudio con un pequeño número de pacientes, y una gran cantidad de gran escala adicional al azar se necesitan estudios controlados para validar críticamente la eficacia de RJ en el LES.