JNK ESTÁ IMPLICADA EN LA INHIBICIÓN DE LA EXPRESIÓN DEL GEN DIANA INFLAMATORIA Y LA ACTIVACIÓN DE NF-KAPPAB POR MELITINA

Hye Ji Park ,  Hwa Jeong Lee ,  Myung Sook Choi , Dong Ju Son ,  Ho Sueb Song ,  Min Jong Song ,  Jeong Min Lee ,  Sang Bae Han , Youngsoo Kim ,  y Jin Tae Hong

Fondo
La terapia de veneno de abeja se ha utilizado para aliviar el dolor y para el tratamiento de enfermedades inflamatorias, incluyendo la artritis reumatoide en los seres humanos  y en animales de experimentación . Veneno de abeja contiene melitina, un péptido de 26 aminoácidos, que forma una hélice anfipática con un carboxilo terminal muy cargado . Anteriormente, se encontró que el veneno de abeja y su componente principal, lipitopolisacárido inhibido por melitina (LPS), el factor de necrosis tumoral α (TNF-α), y nitroprusiato de sodio (SNP) inducida NF-κ B activación de la prevención de la translocación p50 a través de la interacción de melitina y Sulfhidrilo de las quinasas p50 y / o IκB (IKKα e IKKβ), y que inhiben la reacción inflamatoria en el desarrollo de la artritis reumatoide ,
NF-kappa B y IKK han sugerido que desempeñar un papel importante en la regulación de genes inflamatorios, tales como, óxido nítrico sintetasa inducible (iNOS), ciclooxigenasa-2 (COX-2), fosfolipasa A citosólica 2 (la cPLA 2 ), y tumor Factor de necrosis α (TNF-α). Funcionalmente activo NF-κ B existe principalmente como un heterodímero que consiste en subunidades de la familia Rel, y este heterodímero es normalmente secuestrados en el citosol como un complejo inactivo por la unión a inhibitorio κ B (I κ B) en células no estimuladas . El mecanismo de NF-κ B activación implica la fosforilación de I κ Bs vía IKK activación . Una vez que I \ kappa Bs están fosforilados, que son objeto de ubiquitination y posterior degradación por el 26s proteosoma ]. El libre resultante NF-κ B es translocated al núcleo, donde se une a los sitios de unión κ B en las regiones promotoras de los genes objetivo, por lo tanto, controla su expresión . En varios estudios, potentes inhibidores de IKKs prevención de NF-κ B actividad a través de bloqueo de κ B liberación puede ser útil para el tratamiento de enfermedades inflamatorias como la artritis reumatoide (AR) ].
Las cinasas de proteínas activadas por mitógenos (MAP) son un grupo de moléculas de señalización que también parecen desempeñar un papel importante en los procesos inflamatorios. Al menos tres cascadas de MAP quinasa; ERK (quinasa regulada por señal extracelular), JNK (quinasa N-terminal de c-Jun) y p38 están bien descritos, y se ha informado que activan diferencialmente dependiendo de los estímulos y tipos de células . Varios estudios han demostrado que la activación de la MAP quinasa es importante en la regulación de la inflamación a través de controlar la activación de NF-κ B y IKKs .
En el presente estudio, por lo tanto, investigamos si la melitina y el veneno de abeja inhiben NF-kappa B a través de la interrupción de las señales de MAP quinasa, y de ese modo inhiben la respuesta inflamatoria en macrófagos RAW 264.7 y en los sinoviocitos de pacientes con artritis reumatoide.

Discusión
Anteriormente se encontró que el veneno de abeja y su componente principal, la melitina inhibe los estímulos inflamatorios tales como LPS, TNF-α, y SNP inducida por NF-κ B activación de la prevención de la p50 translocación a través de una interacción entre melitina y sulfhydryl grupo de p50 y / o IKK α y IKK β, y que estos inhiben la reacción inflamatoria en el desarrollo de la artritis reumatoide . En el presente estudio, se encontró además que la melitina y el veneno de abeja redujo significativamente la activación inducida por estímulos inflamatorios (LPS y SNP) de la señal JNK, y el inhibidor específico de la señal JNK SP600215 suprimió el efecto inhibitorio de la melitina y el veneno de abeja en el NF-κB Activación y reacción inflamatoria en macrófagos y sinoviocitos de Raw 264.7 obtenidos de pacientes con artritis reumatoide.
LPS y SNP phosphorylates rápidamente ERK, p38 y JNK, que conducen a NF-κ B activación en los macrófagos . La activación de esta quinasa MAP lleva un aumento en la producción de mediadores pro-inflamatorios tales como NO y PGE 2 . Varios estudios han demostrado la implicación de la activación de MAP quinasa en LPS inducida por iNOS y COX-2 expresión  y la activación de NF-κ B  Para demostrar otra vía de NF-κ B inactivación de la melitina y el veneno de abeja, se investigó la relación entre NF-κ B y MAP quinasa activación. Nuestros datos demostraron que la melitina y el veneno de abeja reduce LPS y SNP inducida por la activación de las señales JNK. A pesar de que otras señales (p38 MAP kinasa y ERK señal) también pueden interferir con la melitina y el veneno de abeja dependen de los tipos de células y los estímulos, LPS y SNP inducida por la señal JNK fue específicamente inhibido por la melitina y el veneno de abeja. Este hallazgo está de acuerdo con otros datos que muestran que JNK vía es importante señal en la activación de NF-κ B en los procesos de reacción inflamatoria . En investigaciones más precisas con el inhibidor específico de JNK SP600215, demostramos además que el tratamiento de combinación de inhibidor de JNK con veneno de abeja y la melitina suprimida efectos inhibidores de la melitina y de veneno de abeja en el LPS e inducida por SNP NO y PGE 2 liberación con el efecto suprimida en el efecto inhibidor de la melitina y de veneno de abeja en el NF-κ B DNA vinculante y transcripcional actividades. Además, se demostró que el inhibidor de JNK SP600215 anuló el efecto inhibitorio de la melitina y el veneno de abeja en el LPS y la translocación inducida por SNP de NF-κB por Western Blot, así como la translocación de p50, una subunidad de NF-κB mediante observación confocal de microscopio . Estos datos muestran que la inhibición específica de la vía de JNK puede ser importante para la inactivación de NF-kappa B, y los efectos de este modo inhibidores de la melitina y el veneno de abeja en los LPS y inducida por SNP NO y PGE 2producción. También demostró que el inhibidor de JNK SP600215 anuló el efecto inhibitorio de la melitina y el veneno de abeja en el LPS y la translocación inducida por SNP de NF-κB por Western blotting así como la translocación de p50, una subunidad de NF-κB mediante observación confocal de microscopio. Estos datos muestran que la inhibición específica de la vía de JNK puede ser importante para la inactivación de NF-kappa B, y los efectos de este modo inhibidores de la melitina y el veneno de abeja en los LPS y inducida por SNP NO y PGE 2producción. También demostró que el inhibidor de JNK SP600215 anuló el efecto inhibitorio de la melitina y el veneno de abeja en el LPS y la translocación inducida por SNP de NF-κB por Western blotting así como la translocación de p50, una subunidad de NF-κB mediante observación confocal de microscopio. Estos datos muestran que la inhibición específica de la vía de JNK puede ser importante para la inactivación de NF-kappa B, y los efectos de este modo inhibidores de la melitina y el veneno de abeja en los LPS y inducida por SNP NO y PGE 2producción.
Se ha demostrado la participación de las vías MAPK en las actividades biológicas de la melitina y del veneno de abeja. El veneno de abeja desencadenó la activación de p38 MAPK y JNK y aumento de la liberación de lactato deshidrogenasa (LDH) en la apoptosis inducida por el veneno de la abeja de leucemia humana U937 . Muy similar a nuestro hallazgo, Jang et al. Mostró que el veneno de abeja inhibe el nivel de mRNA de iNOS, COX-2 y NF-κ B en paralelo con la inhibición del nivel de mRNA de MAP quiasa inducida por LPS . Además, también encontramos que el veneno de abeja y la melitina inhibe el factor de crecimiento derivado de plaquetas BB (PDGF-BB) inducida por la proliferación de células del músculo liso a través de la inactivación de NF-κ B a través de la inhibición de ERK vía . Estos resultados sugieren que, La conversación cruzada entre la MAP quinasa y las señales NF-κB puede ser importante para transmitir el efecto biológico de la melitina y el veneno de la abeja. Varios estudios han sido informados de la cruz de hablar entre las señales de MAP quinasa y NF-κ B señales. Minutoli et al., Demostraron la anulación de las señales de JNK y p38, pero el aumento de la actividad de ERK 1/2 por la disrupción del factor de transcripción NF-κB en el desarrollo de la lesión testicular isquemia-reperfusión . También se encontró que el TNF inducida por NF-κ B activación fue derogada en células suprimidas de MKK4 gen que es una doble especificidad quinasa que activa tanto JNK y p38 MAPK . Minutoli et al., Demostraron la anulación de las señales de JNK y p38, pero el aumento de la actividad de ERK 1/2 por la disrupción del factor de transcripción NF-κB en el desarrollo de la lesión testicular isquemia-reperfusión . También se encontró que el TNF inducida por NF-κ B activación fue derogada en células suprimidas de MKK4 gen que es una doble especificidad quinasa que activa tanto JNK y p38 MAPK . Minutoli et al., Demostró la abrogación de señales de JNK y p38, pero la mejora de la actividad de ERK 1/2 por la interrupción del factor transcripcional NF-kappa B en el desarrollo de la lesión por isquemia-reperfusión testicular . También se encontró que el TNF inducida por NF-κ B activación fue derogada en células suprimidas de MKK4 gen que es una doble especificidad quinasa que activa tanto JNK y p38 MAPK .
Las vías de MAPK diferencial en la activación de NF-κ B pueden ser activadas dependen de tipos de células y estímulos, así como las actividades biológicas. Es digno de mención que un NF-κ B quinasa inductora NF-κ B actividad transcripcional a través de un p38 MAPK-dependiente RelA fosforilación vía en la inducción de la expresión de genes pro-inflamatorios . Sin embargo, el acuerdo con nuestro hallazgo, de Haij et al., Demostró que la producción de IL-6 mediada por NF-κB por células epiteliales renales en la inflamación tubulointersticial, un sello de la mayoría de las enfermedades renales está regulada por JNK . JNK vía también está involucrado en la expresión de genes IL-6 mediante el aumento de NF-κ B actividad monocitos humanos  Así como la inducción de las respuestas proinflamatorias en los macrófagos por los glicosilfosfatidilinositoles de Plasmodium falciparum . En conjunto, nuestros datos indican que la inhibición de la señal de JNK es la más implicada en el efecto inhibitorio de la melitina y el veneno de abeja en el LPS y SNP inducida por la activación de NF-κ B, así como en la producción de NO y PGE 2 . En las enfermedades inflamatorias, PGs y NO contribuir a la patofisiología de la inflamación local y crónica . La región promotora del gen murino que codifica iNOS y COX-2 contiene sitios de unión de NF-κB , lo que sugiere que el efecto inhibidor de la expresión génica inflamatoria está relacionado con la inhibición de la actividad de unión a ADN de NF-κB. El potencial terapéutico de la inhibición de NF-κ B actividad ha sido reconocida como una eficaz estrategia anti-inflamatoria tratamiento contra la progresión de la artritis . Por lo tanto, los presentes datos demuestran que la inhibición de la vía JNK también puede contribuir a los efectos antiinflamatorios y antiartritis de la melitina y el veneno de abeja, y el cruce entre las señales JNK y NF-κ B puede ser importante mecanismo antiinflamatorio de la melitina y Veneno de abeja.

Conclusión
Estos datos muestran que la melitina y el veneno de abeja evitan LPS y SNP-inducidos NO y PGE 2 de producción a través de la inactivación dependen de la vía JNK de NF-kappa B, y sugieren que la inactivación de las vías de JNK también puede contribuir a los efectos anti-inflamatorios y anti-artritis de Melitina y veneno de abeja.